全血基因組DNA小量提取試劑盒

Total Blood DNA Miniprep Kit

● 試劑盒內容及保存：

● 儲存條件和效期：

該試劑盒常溫貯存，常溫運輸。開封后有效期一年。

● 產品簡介：

全血基因組DNA 小量提取試劑盒可從200-400 μl體積新鮮、冷凍或抗凝全血樣本中快速分離純化基因組DNA。該試劑盒可以在30分鐘內完成單個或多個樣品的操作。 提取過程無需使用蛋白酶K消化，不需要酚氯仿抽提， 也無需耗時的異丙醇沉淀等過程 。

使用該試劑盒提取到的DNA 可以用于PCR，Southern雜交，酶切消化等實驗。

● 準備工作：

1. 準備無水乙醇；1.5 ml離心管；離心機

2. 按照標簽所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，混勻后蓋緊瓶蓋后常溫貯存備用。

3. 每次使用前請檢查緩沖液DL1和DL2是否有沉淀生成，如果出現沉淀，37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。

● 標準操作步驟：

如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在常溫下離心。

注意：以下方案適用于400 μl體積新鮮或冷凍血液樣本。如果使用低于400 μl的全血樣本，必須按比例減少緩沖液DL1和DL2的用量或者用1×PBS溶液補齊至400 μl，嚴格按照緩沖液DL1：全血：緩沖液DL2=3：4：3體積比進行操作，否則將導致后續操作無法進行。

1. 加入300μl緩沖液DL1于1.5 ml離心管中。

2. 加入400 μl抗凝全血，漩渦劇烈震蕩30秒。 注：如果低于400 μl血液，用1×PBS補齊到400 μl。

3. 加入300μl緩沖液DL2，劇烈搖動離心管3-5次，漩渦劇烈震蕩30秒-60秒。

注：加入緩沖液DL2后，會出現大量血紅蛋白沉淀，必須劇烈震蕩。

4. 12000 rpm 離心2分鐘。

5. 把吸附柱裝在2ml收集管中，將第4步得到的上清溶液（一般可吸取650-700 μl）全部轉入吸附柱中（小心別觸及沉淀），12000 rpm離心2 min，倒棄流出液重新套上收集管。

注：吸附柱的最大體積為850 μl，如上清超過此體積，可分2次離心，保證所有上清都加到柱中。

6.加入500 μl 去蛋白液GB（注意是否已經加入乙醇）至柱子中，12000 rpm離心1min，棄流出液。

7. 將吸附柱重新套回2 ml收集管中，加入700μl 漂洗液PW（注意是否已經加入乙醇）至柱子中，12000 rpm離心1min,倒棄流出液；

8. 再加入500 μl 漂洗液PW（注意是否已經加入乙醇）至吸附柱中，12000 rpm離心1min, 棄流出液。

注：吸附柱膜上如有血色素殘余，這是正�，F象，不會影響DNA的洗脫和純度。

9. 將吸附柱重新套回2 ml收集管中，12000 rpm空甩離心2 min以干燥柱子的基質；

注：這一步驟至關重要，不要省略，否則殘余乙醇會影響后續酶切或PCR實驗。

10. 將柱子置于1.5ml滅菌離心管，向吸附柱O型墊圈中央懸空加入50-100 μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB或滅菌去離子水，蓋好吸附柱管蓋，常溫靜置2 min； 

注： = 1 \* GB3 ① 洗脫緩沖液體積最好不少于50 μl，體積過小影響回收效率。

= 2 \* GB3 ② 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。

11. 12000 rpm離心 2 min洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。

● DNA濃度及純度檢測：

基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。提取的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度�？膳渲�0.8-1.0％瓊脂糖凝膠，使用λ/HindIII判斷基因組的大小，完整的基因組大小應在23kb以上。使用分光光度計檢測時， OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應為1.7–1.9之間，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水洗脫，比值可能偏低，但并不表明DNA純度不高。

● 常見問題分析：

 實驗示例：

400μl human blood gDNA 上樣5μl

人血液基因組擴增人β-球蛋白 1.3kb 片段