RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

●  產品貨號及規格：

●  產品組成：

●  產品簡介：

本試劑盒含有反轉錄需要的全部試劑（RTScript MMLv Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，dNTP、反應 Buffer，Oligo (dT)₁₈，Random primer）,濃度為5×。進行RNA反轉錄反應時，只需加入模板和RNase Free H₂O 即可高效合成第一鏈cDNA，大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。本制品含有去基因組成分gDNA Remover，以RNA為模板進行cDNA第一鏈合成時，可以同步去除基因組DNA污染，與傳統DNaseI消化對比，gDNA Remover消化后無需加入EDTA進行失活；反應結束后，65℃加熱2分鐘，就可以不可逆失活。具有快速簡便、重復性高、特異性好、靈敏度高和穩定性好的特點。該試劑盒采用的反轉錄酶去除了 RNase H活性，從而避免反轉錄過程中降解RNA。 同時經過突變文庫篩選，使得其熱穩定性更強，可耐受50℃高溫反應。相比于低溫條件下反轉錄反應，采用高溫反轉錄可顯著打開 RNA二級結構，從而提高復雜 RNA 模板的擴增性能、提高反轉錄 cDNA的長度（可以獲得12 kb cDNA）和產量，從而提高后續檢測的靈敏度。合成的第一鏈 cDNA可廣泛用于 2nd Strand 的合成、 雜交、 PCR擴增、Real-Time PCR 反應等。

●  貯存和運輸：

開封后-20℃貯存兩年；濕冰運輸。

●  使用方法：

一. 去除基因組DNA污染：

1.1冰上配制如下體系：

1.2輕柔混勻，快甩離心，37℃處理 2 min，去除基因組污染，冰上放置。

注：若RNA中基因組DNA污染嚴重，可以延長37℃處理5 min。

1.3 65℃處理2 min，失活gDNA Remover，冰上放置。

二. 第一鏈cDNA合成（反轉錄反應）：

2.1冰上配制如下體系：

2.2 反轉錄：輕柔混勻，快甩離心； 50℃孵育15 min，

2.3 終止反應：85℃孵育 5 min，終止反應。

反應產物可直接用于 PCR，如果不立即使用，-20℃ 保存，長時間保存建議-80℃ 放置。

●  注意事項：

    5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis MasterMix中已經包含Oligo (dT)₁₈和Random primer，不僅適用于包含poly(A)結構的真核生物mRNA，也適用于不含poly(A)結構的原核生物RNA，真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。