Anti-GAPDH抗體（兔多抗）
Anti-GAPDH Antibody（Polyclonal Antibody from Rabbit）
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產品編號
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產品名稱
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規格
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RGA1040
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Anti-GAPDH抗體（兔多抗）
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20 μl
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● 產品簡介
甘油醛-3- 磷酸脫氫酶（ Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH） 是糖酵解（glycolysis）過程中的關鍵酶，分子量為37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反應。GAPDH 作為管家基因在同種細胞或者組織中一般是恒定、高水平表達的，常用作Western
Blot實驗的內參照。
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來源
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用途及稀釋比例
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抗體類型
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GAPDH分子量
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Rabbit
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WB 1:2000-5000
IHC 1:200-1000
IF 1:200-1000
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多克隆抗體
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36-38 kD
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注：WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation;
IF, Immunofluorescence
本抗體如果用于常規的Western檢測，至少可以檢測20次。
● 貯存形式：
穩定溶液，1 mg/ml 抗體溶于PBS，50%甘油，pH7.2。
● 保存及運輸條件：
-20℃保存，一年有效；避免反復凍融；濕冰運輸。
● 使用說明：
1. Western Blot雜交(ECL顯色)：1:2000-5000稀釋，常溫孵育1-2 h或4℃過夜。
2. 免疫熒光（IF）和免疫組化（IHC）：1:200-1000稀釋。
三 實驗示例：
Jurkat總蛋白，細胞漿蛋白，細胞核蛋白GAPDH檢測
總蛋白提�。�4×106 Jurkat細胞，2000 g 離心收集，去上清，沉淀中加入200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰上裂解5分鐘，4℃ 16000 g 15 分鐘，上清即為總蛋白（TP）。
細胞漿蛋白：4×106 Jurkat細胞，2000 g 離心收集，加入400 μl細胞漿蛋白抽提試劑A（加4 μl 100mM PMSF，加0.4 μl 1 M DTT），懸浮沉淀，冰浴15分鐘；加入20 μl細胞漿蛋白抽提試劑B，混勻，冰上孵育1分鐘，震蕩5秒，4℃ 16000g 10分鐘，小心收集上清即為細胞漿蛋白（C-Pr），不要觸及沉淀。
細胞核蛋白提�。�沉淀用200 μl 1×PBS漂洗一次，4℃ 16000 g 2分鐘；沉淀中加入200 μl 細胞核蛋白抽提試劑（加2 μl 100mM PMSF，加0.2 μl 1 M DTT），重懸沉淀，劇烈震蕩15秒，冰浴40分鐘，每間隔10分鐘劇烈震蕩15秒；4℃ 16000 g 5分鐘，上清即為細胞核蛋白（N-Pr）。
電泳：RTD6132-15%3.3C 200V 33-12 mA 55 min
轉膜：NC膜，1×RealBlot快速轉膜液濕轉，穩流400 mA，電壓變化64-57 V，轉膜時間35 min
封閉：無蛋白快速封閉液RT 20 min
一抗孵育：GAPDH 羊抗兔多抗，一抗稀釋液稀釋1：2000
二抗孵育：羊抗兔IgG-HRP，二抗稀釋液稀釋1：5000
檢測：ECL發光檢測
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